Plasmide CRISPR d'Activation (h) GIPC2: sc-405087-ACT

GIPC2 (GAIP-interacting protein, extrémité C-terminale 2) est une protéine adaptatrice contenant un domaine PDZ, impliquée dans l’organisation de complexes de signalisation associés à la membrane et dans la coordination du trafic des récepteurs. Par des interactions protéine–protéine médiées par le domaine PDZ, GIPC2 peut influencer le tri endocytique, le transport vésiculaire et la propagation des signaux en aval, qui façonnent la polarité cellulaire, la migration et les programmes de contrôle de la croissance. Des profils d’expression altérés des adaptateurs de la famille GIPC ont été associés à des circuits de signalisation dérégulés en cancérologie et dans d’autres troubles impliquant un renouvellement aberrant des récepteurs, ce qui justifie l’étude de GIPC2 dans des états transcriptionnels et phénotypiques dépendants du contexte. L’étude de la régulation de GIPC2 aide à clarifier comment les protéines d’échafaudage couplent la dynamique des récepteurs de surface aux voies intracellulaires qui gouvernent le comportement cellulaire.

GIPC2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GIPC2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GIPC2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GIPC2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GIPC2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GIPC2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GIPC2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GIPC2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GIPC2 dans les cellules tumorales présentant une expression de GIPC2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.