Plásmido CRISPR de Activación (m) ghrelin: sc-425542-ACT

El gen Ghrl en el ratón codifica la grelina, una hormona peptídica secretada producida principalmente por el estómago que actúa a través del receptor secretagogo de la hormona del crecimiento para coordinar el equilibrio energético y la función neuroendocrina. La grelina regula el apetito, la adiposidad, la homeostasis de la glucosa, la motilidad gastrointestinal y la liberación de la hormona del crecimiento, integrando el estado metabólico periférico con las redes de señalización del hipotálamo y la hipófisis. Los procesos posteriores convergen con la detección de nutrientes dependiente de AMPK y con circuitos que controlan la recompensa, las respuestas al estrés y la inflamación. La alteración de la señalización de la grelina se ha asociado con fenotipos de obesidad y síndrome metabólico, así como con caquexia, resistencia a la insulina y cambios neuroconductuales en modelos experimentales.

ghrelin El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Ghrl sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ghrelin El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Ghrl en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Ghrl, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ghrelin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Ghrl y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ghrelin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ghrelin en células tumorales con expresión de Ghrl silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.