Plasmide Double Nickase (h) Gelsolin: sc-401005-NIC

GSN code la gelsoline, une protéine de liaison à l’actine régulée par le Ca²⁺, qui sectionne et coiffe les filaments d’actine afin de remodeler le cytosquelette et de contrôler la forme cellulaire, l’adhésion et la motilité. En régulant la dynamique de l’actine, la gelsoline influence des processus tels que l’endocytose, le trafic membranaire et l’apoptose, et s’inscrit à l’interface de réseaux de signalisation incluant les phosphoinositides et les voies des GTPases de la famille Rho, qui coordonnent le renouvellement du cytosquelette. Une activité ou une expression altérée de la gelsoline a été associée à des phénotypes de migration et d’invasion cellulaires dérégulés, et elle est étudiée dans des contextes variés, notamment l’inflammation, la neurobiologie et le remodelage cardiovasculaire. Des variants pathogènes de GSN sont également associés à des troubles amyloïdogènes liés au mauvais repliement des protéines, soulignant sa pertinence dans l’homéostasie protéique et les pathologies impliquant la matrice extracellulaire.

Gelsolin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GSN dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GSN. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GSN. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GSN.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.