Plásmido Doble Nickase (h) GCSFR: sc-402269-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)G-CSFR consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa G-CSFR (h) y el plásmido de doble nickasa G-CSFR (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CSF3R. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: G-CSFR Anticuerpo (A-7): sc-514639
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) GCSFR | sc-402269-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) G-CSFR | sc-402269-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CSF3R codifica el receptor del factor estimulante de colonias de granulocitos (GCSFR), un receptor de citocinas de tipo I que regula la producción, la maduración y la activación funcional de los neutrófilos en el linaje mieloide. Tras la unión del ligando, GCSFR señala principalmente a través de las cascadas JAK/STAT, PI3K/AKT y MAPK para controlar la proliferación, la supervivencia, la diferenciación y el tráfico de los progenitores granulocíticos. La regulación estricta de la señalización de CSF3R es esencial para la homeostasis hematopoyética, y la actividad alterada del receptor se ha vinculado con una mielopoyesis desordenada y la transformación leucémica en múltiples contextos de enfermedad. Dado que CSF3R integra señales de citocinas con programas transcripcionales que controlan la granulopoyesis, se estudia con frecuencia en modelos de inflamación, desarrollo de la inmunidad innata y mecanismos de malignidad mieloide.
G-CSFR El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CSF3R en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CSF3R. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CSF3R. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CSF3R alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.