GCS-β-1 Plasmide Double Nickase (h): sc-403225-NIC

GUCY1B3 codifica la subunità β3 della guanilato ciclasi solubile (sGC-β-1), un recettore chiave per l’ossido nitrico che catalizza la conversione del GTP in cGMP. Questo asse NO–sGC–cGMP regola il rilasciamento della muscolatura liscia vascolare, la funzione piastrinica e la neurotrasmissione attraverso effettori a valle quali la protein chinasi dipendente dal cGMP e le fosfodiesterasi, integrando segnali che controllano il tono cellulare e la segnalazione sensibile allo stato redox. Alterazioni della segnalazione del cGMP e della composizione delle subunità della sGC sono state associate alla biologia cardiovascolare e polmonare, alle risposte infiammatorie e a un’omeostasi emostatica deregolata, rendendo GUCY1B3 un bersaglio utile per studi meccanicistici della trasduzione del segnale dipendente da NO. Nei modelli cellulari umani, la perturbazione di GUCY1B3 può aiutare a chiarire come l’attività della sGC contribuisca alla dinamica del cGMP e ai successivi adattamenti trascrizionali e metabolici.

GCS-β-1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GUCY1B3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GUCY1B3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GUCY1B3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GUCY1B3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.