Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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GCS-β-1 Double Nickase Plasmid (h): sc-403225-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GCS-β-1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GCS-β-1 Double-Nickase-Plasmid (h) und GCS-β-1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GUCY1B3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: GCS-β-1: sc-514183
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GCS-β-1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403225-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GCS-β-1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403225-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GUCY1B3 kodiert die β3‑Untereinheit der löslichen Guanylylcyclase (sGC‑β‑1), einen zentralen Rezeptor für Stickstoffmonoxid (NO), der die Umwandlung von GTP zu cGMP katalysiert. Diese NO–sGC–cGMP‑Achse reguliert die Relaxation der glatten Gefäßmuskulatur, die Thrombozytenfunktion und die Neurotransmission über nachgeschaltete Effektoren wie die cGMP‑abhängige Proteinkinase (PKG) und Phosphodiesterasen und integriert Signale, die den zellulären Tonus sowie redoxabhängige Signalwege steuern. Veränderte cGMP‑Signalgebung und eine abweichende Zusammensetzung der sGC‑Untereinheiten wurden mit kardiovaskulären und pulmonalen Funktionen, Entzündungsreaktionen und einer gestörten Hämostase in Verbindung gebracht, wodurch GUCY1B3 ein hilfreiches Ziel für mechanistische Studien zur NO‑abhängigen Signaltransduktion darstellt. In humanen Zellmodellen kann die gezielte Beeinflussung von GUCY1B3 dazu beitragen, zu klären, wie die sGC‑Aktivität zur cGMP‑Dynamik sowie zu nachgeschalteten transkriptionellen und metabolischen Anpassungen beiträgt.
GCS-β-1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GUCY1B3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GUCY1B3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GUCY1B3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GUCY1B3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.