Plasmide Double Nickase (h) GCS-α-1: sc-405263-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GCS-α-1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GCS-α-1 Double Nickase (h) et le plasmide GCS-α-1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GUCY1A3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: GCS-α-1 Antibody (D-9): sc-376502
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) GCS-α-1 | sc-405263-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) GCS-α-1 | sc-405263-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GUCY1A3 code la sous-unité α1 de la guanylate cyclase soluble (sGC-α1), un récepteur de l’oxyde nitrique contenant un hème, qui s’associe à la sous-unité β1 pour produire le GMP cyclique (cGMP) à partir du GTP. Cet axe de signalisation NO–sGC–cGMP régule la relaxation du muscle lisse vasculaire, la fonction plaquettaire et, plus largement, les processus dépendants du cGMP via des effecteurs tels que la PKG et les canaux ioniques activés par le cGMP. Dans les cellules humaines, GUCY1A3 contribue à une signalisation sensible à l’état rédox et s’intègre à des voies contrôlant la communication endothélio-vasculaire et le tonus du cytosquelette. Des variations génétiques ou une expression altérée de GUCY1A3 ont été associées à des phénotypes cardiovasculaires et thrombotiques, ce qui étaye son utilisation dans des études mécanistiques de la réponse au NO et de l’homéostasie du cGMP.
GCS-α-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GUCY1A3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GUCY1A3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GUCY1A3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GUCY1A3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.