Plásmido Doble Nickase (m) GCN2: sc-424196-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)GCN2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa GCN2 (m) y el plásmido de doble nickasa GCN2 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Eif2ak4. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) GCN2 | sc-424196-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) GCN2 | sc-424196-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen Eif2ak4 del ratón codifica GCN2, una quinasa de serina/treonina que vincula la limitación de aminoácidos y otros tipos de estrés nutricional con el control de la traducción mediante la fosforilación de eIF2α. Este eje de señalización activa la respuesta integrada al estrés, remodelando los programas de traducción de ARNm y coordinando una transcripción adaptativa a través de vías dependientes de ATF4, con efectos posteriores sobre la autofagia, el equilibrio redox y la homeostasis metabólica. La actividad de GCN2 converge con mTOR y con la detección de estrés asociada a los ribosomas para modular el crecimiento y la supervivencia celular durante la privación de nutrientes. La señalización desregulada de GCN2 se ha implicado en contextos como la inflamación, la neurodegeneración y la biología tumoral, lo que convierte a Eif2ak4 en un objetivo frecuente en estudios mecanísticos de redes adaptativas al estrés.
GCN2 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Eif2ak4 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Eif2ak4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Eif2ak4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Eif2ak4 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.