GCN1L1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-411545

Übersicht

GCN1 (kodiert durch GCN1L1) ist ein konservierter Kofaktor der integrierten Stressantwort (ISR), der die aminosäuresensitive Kontrolle der Translation über die GCN2–eIF2α-Achse unterstützt. Indem GCN1L1 unter Nährstofflimitierung und ribosomenassoziiertem Stress die Aktivierung von eIF2α-Kinasen erleichtert, trägt es zu einer globalen Dämpfung der Translation sowie zur selektiven Induktion stressadaptiver Programme wie der ATF4-abhängigen Transkription bei. Diese Regulation verknüpft GCN1L1 mit der Proteostase, mit oxidativen und mitochondrialen Stressantworten sowie mit der übergeordneten metabolischen Homöostase. Eine Fehlregulation der translationalen Stresssignalgebung und der Nährstoffantwortwege, in denen GCN1L1 wirkt, wurde mit Phänotypen in Verbindung gebracht, die für die Krebsbiologie, Neurodegeneration und entzündliche Zustände relevant sind, was mechanistische Untersuchungen in humanen Zellmodellen unterstützt.

Das GCN1L1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des GCN1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des GCN1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von GCN1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GCN1L1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von GCN1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GCN1L1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf GCN1-Exone abzielen, die für die GCN1L1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere GCN1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GCN1L1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom GCN1L1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des GCN1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GCN1L1 HDR-Plasmid (h) und GCN1L1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von GCN1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten GCN1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.