Plásmido Doble Nickase (h) GATA4: sc-400122-NIC

GATA4 codifica un factor de transcripción con dedos de zinc que se une a motivos GATA para regular programas génicos que controlan la morfogénesis cardíaca, la diferenciación de los cardiomiocitos y el desarrollo de órganos derivados del endodermo. En conjunto con cofactores como NKX2-5, TBX5 y proteínas de la familia FOG, GATA4 integra señales de vías como BMP, WNT y MAPK para coordinar la especificación de linajes y la remodelación tisular. Alteraciones en la dosis o en la secuencia de GATA4 pueden perturbar las redes transcripcionales que gobiernan el desarrollo del corazón y del aparato gastrointestinal, y la desregulación de la actividad de potenciadores dependientes de GATA4 se ha relacionado con defectos cardíacos congénitos y cambios en la expresión génica asociados a cardiomiopatías. Como regulador nodal de la transcripción asociada a la cromatina, GATA4 se utiliza ampliamente para estudiar circuitos reguladores del desarrollo y el control del destino celular.

GATA4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GATA4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GATA4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GATA4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GATA4 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.