Plásmido CRISPR de Activación (h) GATA4: sc-400122-ACT

GATA4 codifica un factor de transcripción con dedos de zinc que se une a motivos GATA para regular programas génicos que controlan la morfogénesis cardíaca, la diferenciación de cardiomiocitos y el desarrollo de tejidos derivados del endodermo. Funciona dentro de redes de especificación de linaje junto con factores como NKX2-5 y TBX5, integrando señales para modular la accesibilidad de la cromatina y la salida transcripcional durante el desarrollo y las respuestas al estrés. En tejidos adultos, GATA4 influye en la señalización de hipertrofia cardíaca y en vías de supervivencia, y su expresión alterada o ciertas variantes se han asociado con defectos cardíacos congénitos y cardiomiopatías. La actividad desregulada de GATA4 también se estudia en contextos de diferenciación gastrointestinal y reprogramación transcripcional oncogénica.

GATA4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GATA4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GATA4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GATA4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GATA4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GATA4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GATA4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GATA4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GATA4 en células tumorales con expresión de GATA4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.