Plasmide CRISPR/Cas9 KO GATA-6 (h): sc-400724

Présentation

GATA6 code pour GATA-6, un facteur de transcription à doigts de zinc qui se lie à des motifs GATA afin de réguler la spécification des lignages et les programmes de différenciation dans les tissus issus de l’endoderme et du mésoderme. Il participe à des réseaux transcriptionnels avec des facteurs tels que NKX2-5 et des membres de la famille TBX pour coordonner l’organogenèse et les décisions de destin cellulaire, et il s’articule avec des signaux provenant notamment des voies WNT, BMP et TGF-β. Dans les cellules adultes, GATA-6 contribue à la régulation des gènes épithéliaux et du muscle lisse, au métabolisme cellulaire et au remodelage transcriptionnel en réponse au stress. Une activité dérégulée de GATA6 a été associée à des anomalies du développement et est fréquemment étudiée dans le contexte d’états de différenciation altérés et de dépendances transcriptionnelles observés dans de multiples modèles de maladies, dont le cancer.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GATA-6 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GATA6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GATA6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GATA6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GATA-6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GATA6 pour l'étude de la signalisation de GATA-6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GATA6 essentiels à la fonction de GATA-6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GATA6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GATA-6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GATA-6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GATA6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GATA-6 plasmide HDR (h) et le GATA-6 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GATA6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GATA6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.