Plasmide CRISPR d'Activation (h) gamma Synuclein/SNCG: sc-401050-ACT

SNCG code la gamma-synucléine, une petite protéine neuronale impliquée dans la fonction synaptique, la dynamique du cytosquelette et le trafic vésiculaire, avec des rôles plus larges dans les réponses cellulaires au stress. Dans des contextes non neuronaux, la gamma-synucléine a été associée à la modulation de la stabilité des microtubules, à la propension à l’agrégation des protéines et à des programmes de signalisation qui influencent la prolifération et la migration. Une expression dérégulée de SNCG a été rapportée dans de nombreux cancers et est fréquemment étudiée comme marqueur de progression tumorale et de potentiel métastatique, tout en recoupant également des voies pertinentes pour la neurodégénérescence. Ces caractéristiques font de SNCG un nœud utile pour analyser le contrôle transcriptionnel, la protéostasie et les réseaux de signalisation associés au cytosquelette.

gamma Synuclein/SNCG Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SNCG sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

gamma Synuclein/SNCG Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SNCG dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SNCG, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de gamma Synuclein/SNCG. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SNCG natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de gamma Synuclein/SNCG au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie gamma Synuclein/SNCG dans les cellules tumorales présentant une expression de SNCG silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.