GALK1 Plasmide Double Nickase (h): sc-405217-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GALK1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GALK1 Double Nickase Plasmid (h) e il GALK1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GALK1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GALK1 Antibody (A-2): sc-393404
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GALK1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-405217-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GALK1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405217-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GALK1 codifica per la galattochinasi 1, l’enzima ATP-dipendente che catalizza la fosforilazione dell’α-D-galattosio a galattosio-1-fosfato nel primo passaggio irreversibile della via di Leloir. Questa reazione sostiene il flusso dei carboidrati verso la produzione di UDP-galattosio, influenzando la capacità di glicosilazione e, più in generale, l’omeostasi energetica cellulare e dei nucleotidi-zucchero. Un’attività alterata di GALK1 perturba l’utilizzo del galattosio e l’equilibrio dei metaboliti, aspetto rilevante per lo studio degli errori congeniti del metabolismo del galattosio e degli effetti a valle sulle risposte cellulari allo stress. In quanto enzima metabolico citosolico, GALK1 rappresenta un nodo accessibile per indagare la regolazione dipendente dai nutrienti e l’interazione tra vie metaboliche, inclusa la glicolisi e la biosintesi dei glicani.
GALK1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GALK1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GALK1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GALK1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GALK1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.