Plásmido Doble Nickase (h) galectin-4: sc-404255-NIC

LGALS4 codifica la galectina-4, una lectina de unión a β-galactósidos enriquecida en tejidos intestinales y epiteliales que actúa en la superficie celular y en el medio extracelular para organizar interacciones dependientes de glicanos. Al unirse a glicoproteínas y glicolípidos específicos, la galectina-4 contribuye a la polaridad epitelial, a la estabilidad de las uniones adherentes y estrechas, y a la modulación de la adhesión célula–célula y célula–matriz, influyendo en la migración y la homeostasis de la barrera. La actividad de la galectina-4 se entrecruza con procesos vinculados a la inmunidad mucosa y a la señalización inflamatoria mediante la regulación del agrupamiento de receptores y del tráfico endocítico. La expresión desregulada de LGALS4 se ha asociado con alteraciones en la diferenciación epitelial y con contextos de enfermedad colorrectal, lo que la convierte en un objetivo útil para analizar la señalización mediada por glicanos y la biología de la barrera.

galectin-4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus LGALS4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de LGALS4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de LGALS4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con LGALS4 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.