GALE Double Nickase Plasmid (h): sc-408127-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GALE Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GALE Double-Nickase-Plasmid (h) und GALE Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GALE abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: GALE: sc-390407
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GALE Double Nickase Plasmid (h) | sc-408127-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GALE Double Nickase Plasmid (h2) | sc-408127-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GALE kodiert die UDP-Galactose-4-Epimerase, ein zytosolisches Enzym, das UDP-Galactose und UDP-Glucose reversibel ineinander umwandelt und außerdem die für den Aminozuckerstoffwechsel erforderliche Epimerisierung von UDP-GalNAc zu UDP-GlcNAc katalysiert. Über diese Reaktionen unterstützt GALE den Leloir-Stoffwechselweg der Galactoseverwertung und stellt Nukleotidzucker-Substrate für die Glykosylierung bereit, wodurch es die Biosynthese von Proteoglykanen und Glykoproteinen im sekretorischen Weg beeinflusst. Eine Störung der GALE-Aktivität beeinträchtigt die zelluläre Kohlenhydrat-Homöostase und kann die Glykanzusammensetzung verändern, mit nachgelagerten Effekten auf Proteinfaltung, -transport und -signalgebung. Eine Funktionsstörung von GALE beim Menschen ist mit Formen der Galaktosämie assoziiert, was das Gen zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung von Stoffwechselstressantworten und glykosylierungsgekoppelten Phänotypen in Modellsystemen macht.
GALE Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GALE-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GALE abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GALE-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GALE-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.