GADD 45γ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402483-ACT

GADD45G (GADD45γ) é um membro da família GADD45 responsivo ao estresse, que conecta estímulos genotóxicos e inflamatórios ao controle de checkpoints do ciclo celular, à sinalização de reparo de DNA e à apoptose. Ele participa de vias centradas na sinalização de MAPK, em respostas ao estresse dependentes de p53 e na modulação da atividade de CDKs para impor parada de crescimento durante danos celulares ou programas de diferenciação. Por meio dessas funções, o GADD45γ contribui para a manutenção da estabilidade genômica e para a regulação de estados de células imunes e hematopoéticas. A expressão alterada de GADD45G tem sido associada a proliferação desregulada, sinalização de estresse aberrante e padrões de silenciamento epigenético relatados em múltiplos contextos de malignidade, tornando-o um nó útil para estudos mecanísticos de redes supressoras de tumor.

GADD 45γ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GADD45G sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GADD 45γ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GADD45G em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GADD45G, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GADD 45γ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GADD45G nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GADD 45γ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GADD 45γ em células tumorais com expressão de GADD45G silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.