Plásmido CRISPR de Activación (h) GAD-65: sc-402137-ACT
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmdo de Activación CRISPR (h) GAD-65 es un sistema de activación de la trascripción mediante una activación sinérgica (SAM), diseñado para incrementar la expresión de un gen concreto
- Los Plásmdo de Activación CRISPR (h) GAD-65 incluyen los siguientes tres plásmidos, con un radio 1:1:1 : plásmido codificador de la nucleasa Cas 9 desactivada (dCas9), (D10A y N863A) fusionadas al dominio de transactivación VP64 y el gen de resistencia a blasticidina; plásmido codificador de la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 y el gen de resistencia a Higromicina; plásmido codificador de la secuencia diana específica de 20 nt de ARN y el gen de resistencia a puromicina.
- El complejo SAM resultante se une en un punto específico a unos 200 -250 nt aguas arriba del inicio de la transcripción del gen diana y ofrece un potente punto de reclutamiento de factores de transcripción para un eficiente incremento de la activación genica.
- Los gRNA codificados por el plásmido de activación CRISPR GAD-65 (h) y el plásmido de activación CRISPR GAD-65 (h2) se dirigen a regiones reguladoras distintas situadas aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción de GAD2. Puede que haya uno o ambos diseños disponibles
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: GAD-65 Anticuerpo (A-3): sc-377145
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido CRISPR de Activación (h) GAD-65 | sc-402137-ACT | 20 µg | $397.00 |
GAD2 codifica la descarboxilasa del glutamato 65 (GAD-65), una enzima dependiente de fosfato de piridoxal que cataliza la descarboxilación del glutamato para producir ácido γ-aminobutírico (GABA), uno de los principales neurotransmisores inhibidores del sistema nervioso central humano. GAD-65 se encuentra enriquecida en las terminales presinápticas, donde favorece la síntesis de GABA dependiente de la actividad y contribuye al ciclo de las vesículas sinápticas y a la homeostasis de los circuitos inhibidores. Al regular el equilibrio entre excitación e inhibición, GAD2 influye en redes de señalización neuronal implicadas en el neurodesarrollo, la plasticidad sináptica y los circuitos que responden al estrés. La alteración de la expresión o la función de GAD-65 se ha investigado en el contexto de fenotipos neurológicos y neuropsiquiátricos asociados a una neurotransmisión gabaérgica alterada, incluida la susceptibilidad a las convulsiones y la disfunción de interneuronas inhibitorias.
GAD-65 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GAD2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.
GAD-65 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GAD2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.
Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GAD2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GAD-65. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GAD2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GAD-65 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GAD-65 en células tumorales con expresión de GAD2 silenciada o reducida.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.