GABAA Rπ Plasmide Double Nickase (h): sc-404623-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GABAA Rπ Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GABAA Rπ Double Nickase Plasmid (h) e il GABAA Rπ Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GABRP. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GABAA Rπ Plasmide Double Nickase (h) | sc-404623-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GABAA Rπ Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404623-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GABRP codifica la subunità π del recettore umano GABA\(_A\), un canale del cloruro attivato da ligando che media la neurotrasmissione inibitoria e modula l’eccitabilità di membrana tramite una segnalazione rapida sia sinaptica sia extrasinaptica. L’incorporazione della subunità π può modificare l’assemblaggio del recettore, le cinetiche di gating e la farmacologia, influenzando il flusso di cloruro, i pattern di scarica neuronale e una più ampia inibizione a livello di circuito. La segnalazione del recettore GABA\(_A\) interagisce con processi quali la plasticità sinaptica, il neurosviluppo e la modulazione delle reti neuronali responsiva allo stress. Una segnalazione GABAergica disregolata, inclusa un’alterata composizione delle subunità recettoriali, è stata associata in letteratura a fenotipi neurologici e neuropsichiatrici, supportando lo studio di GABRP in modelli cellulari rilevanti per la malattia.
GABAA Rπ Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GABRP nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GABRP. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GABRP. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GABRP interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.