GABAA Rβ1 Plasmide Double Nickase (h): sc-403935-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GABAA Rβ1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GABAA Rβ1 Double Nickase Plasmid (h) e il GABAA Rβ1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GABRB1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GABAA Rβ1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403935-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GABAA Rβ1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403935-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GABRB1 codifica la subunità β1 del recettore umano GABA\(_A\), un canale del cloruro pentamerico attivato da ligando che media la rapida neurotrasmissione inibitoria nel sistema nervoso centrale. L’incorporazione delle subunità β è fondamentale per l’assemblaggio del recettore, il traffico intracellulare e la localizzazione sinaptica, modulando la conduttanza al cloruro e l’eccitabilità neuronale. La segnalazione del recettore GABA\(_A\) interagisce con la plasticità dipendente dall’attività, le oscillazioni di rete e il controllo omeostatico dell’equilibrio tra eccitazione e inibizione. Alterazioni dell’espressione di GABRB1 o della composizione del recettore sono state associate, in studi genetici e funzionali, a fenotipi neuroevolutivi e neuropsichiatrici, a supporto della sua rilevanza nei meccanismi alla base di epilessia, disabilità intellettiva e disturbi correlati.
GABAA Rβ1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GABRB1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GABRB1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GABRB1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GABRB1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.