Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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GABAA Rα5 Plasmide Double Nickase (h): sc-402696-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GABAA Rα5 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GABAA Rα5 Double Nickase Plasmid (h) e il GABAA Rα5 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GABRA5. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GABAA Rα5 Antibody (A-5): sc-393921
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GABAA Rα5 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402696-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GABAA Rα5 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402696-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GABRA5 codifica la subunità α5 del recettore umano GABA\_A, un canale del cloro attivato da ligando che media la neurotrasmissione inibitoria nel sistema nervoso centrale. I recettori contenenti α5 sono arricchiti in sedi extrasinaptiche e contribuiscono all’inibizione tonica, modulando l’eccitabilità neuronale, l’integrazione sinaptica e la plasticità attraverso l’omeostasi del cloro e la segnalazione GABAergica. Questa subunità partecipa alla regolazione della rete dipendente dall’attività e interagisce funzionalmente con vie che governano i circuiti dell’apprendimento e della memoria. La disregolazione della segnalazione dei recettori GABA\_A contenenti α5 è stata associata a fenotipi neuropsichiatrici e del neurosviluppo, a supporto del suo impiego in studi meccanicistici sulla funzione dei circuiti inibitori.
GABAA Rα5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GABRA5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GABRA5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GABRA5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GABRA5 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.