GABA_A Rα3 Plasmide Double Nickase (h): sc-403044-NIC

GABRA3 codifica la subunità α3 del recettore umano dell’acido γ-aminobutirrico di tipo A (GABAA Rα3), un componente di un canale del cloruro attivato da ligando che media la rapida neurotrasmissione inibitoria nel sistema nervoso centrale. L’incorporazione della subunità α3 nei recettori GABAA pentamerici influenza la cinetica del canale, la segnalazione sinaptica rispetto a quella extrasinaptica e l’eccitabilità neuronale attraverso la conduttanza del cloruro e la regolazione del potenziale di membrana. La segnalazione GABAergica mediata dai recettori GABAA si integra con la modulazione dipendente dalla fosforilazione, il trafficking recettoriale e le vie di organizzazione delle sinapsi che plasmano le oscillazioni di rete e la formazione dei circuiti durante lo sviluppo. Alterazioni dell’espressione o della funzione delle subunità del recettore GABAA, inclusa GABRA3, sono studiate in relazione a fenotipi neurosviluppativi e neuropsichiatrici e a meccanismi legati alle crisi epilettiche.

GABAA Rα3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GABRA3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GABRA3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GABRA3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GABRA3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.