GABA_A Rα3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403044-ACT

GABRA3 codifica la subunità alfa 3 del recettore umano dell’acido γ-aminobutirrico di tipo A (GABAA Rα3), componente di un canale del cloruro regolato da ligando che media una rapida neurotrasmissione inibitoria. L’incorporazione della subunità α3 nei recettori GABAA pentamerici modula l’apertura del canale, la farmacologia e il tono inibitorio sinaptico rispetto a quello extrasinaptico, influenzando l’eccitabilità neuronale e le oscillazioni di rete. GABAA Rα3 partecipa alla funzione delle sinapsi GABAergiche e a processi neuroevolutivi più ampi, inclusi l’accrescimento dei neuriti e la maturazione dei circuiti, tramite segnali dipendenti dall’attività. In ambito di ricerca, un’alterata espressione di GABRA3 o uno squilibrio della segnalazione inibitoria sono stati associati a fenotipi neurologici e a stati rilevanti per la malattia, in cui una compromissione dell’equilibrio eccitazione–inibizione contribuisce alla fisiopatologia.

GABAA Rα3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GABRA3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GABAA Rα3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GABRA3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GABRA3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GABAA Rα3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GABRA3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GABAA Rα3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GABAA Rα3 nelle cellule tumorali con espressione di GABRA3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.