Plasmide CRISPR/Cas9 KO GABA T-1 (h): sc-411007

Présentation

SLC6A1 code le transporteur humain du GABA de type 1 (GABA T-1), un transporteur membranaire plasmatique à haute affinité, dépendant du Na+/Cl−, qui élimine l’acide γ‑aminobutyrique (GABA) des espaces synaptiques et extrasynaptiques afin de façonner la neurotransmission inhibitrice. En régulant la recapture du GABA, GABA T-1 influence l’excitabilité neuronale, la synchronisation synaptique et les oscillations des réseaux, reliant l’activité du transporteur au cycle des neurotransmetteurs et aux processus de transport couplés aux ions. Le dysfonctionnement de SLC6A1 est associé à des phénotypes neurodéveloppementaux et liés à l’épilepsie, et une altération de l’homéostasie du GABA a été impliquée dans des mécanismes plus larges de déséquilibre des circuits corticaux. La perturbation expérimentale de SLC6A1 étaye des études à l’échelle des voies de signalisation inhibitrice, de la dynamique d’activation des récepteurs et de la compensation par des transporteurs apparentés de la famille des solute carriers.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GABA T-1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SLC6A1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SLC6A1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SLC6A1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GABA T-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SLC6A1 pour l'étude de la signalisation de GABA T-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SLC6A1 essentiels à la fonction de GABA T-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SLC6A1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GABA T-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GABA T-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SLC6A1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GABA T-1 plasmide HDR (h) et le GABA T-1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SLC6A1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SLC6A1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.