G6Pase-α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420443

Übersicht

G6pc kodiert die Glukose-6-Phosphatase alpha (G6Pase-α), ein Enzym der Membran des endoplasmatischen Retikulums, das den letzten Schritt der Glukoneogenese und Glykogenolyse katalysiert, indem es Glukose-6-phosphat zu freier Glukose und anorganischem Phosphat hydrolysiert. In Leber, Niere und Darmepithel der Maus unterstützt G6Pase-α die Aufrechterhaltung der Glukosehomöostase im Fastenzustand und ist in Signal- und Stoffwechselwege eingebunden, die den Glykogenumsatz, die hepatische Glukosefreisetzung und den ER-lokalisierten Kohlenhydratstoffwechsel steuern. Eine Störung der G6Pase-α-Aktivität ist mechanistisch mit Phänotypen der Glykogenspeicherung und metabolischen Dysregulation verknüpft, wodurch G6pc ein zentrales Ziel für die Untersuchung der Glukoseverwertung und hepato-metabolischer Stressantworten darstellt. G6pc-Modelle werden außerdem eingesetzt, um die transkriptionelle und hormonelle Regulation glukoneogener Programme sowie die Funktion von ER-Membranenzy­men zu untersuchen.

Das G6Pase-α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des G6pc-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des G6pc-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von G6pc nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die G6Pase-α-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von G6pc-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der G6Pase-α-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf G6pc-Exone abzielen, die für die G6Pase-α-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere G6pc-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom G6Pase-α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom G6Pase-α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des G6pc-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das G6Pase-α HDR-Plasmid (m) und G6Pase-α HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von G6pc-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten G6pc-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.