Plasmide Double Nickase (h) FX: sc-408777-NIC

TSTA3 code la GDP-L-fucose synthase (FX), une enzyme cytosolique qui catalyse les étapes finales de la voie de biosynthèse de novo du GDP-fucose à partir du GDP-mannose. En contrôlant la disponibilité intracellulaire du GDP-fucose, FX soutient la fucosylation des glycannes des protéines de surface cellulaire et des protéines sécrétées, influençant le repliement des protéines, les interactions récepteur–ligand et la communication avec la matrice extracellulaire. Une fucosylation altérée est associée à des modifications de l’adhérence et de la signalisation cellulaires, avec des implications pour la modulation immunitaire, l’inflammation et le remodelage des glycannes lié aux tumeurs. La perturbation ou la dérégulation de TSTA3 peut donc affecter des voies dépendantes de la glycosylation qui façonnent le développement et des phénotypes cellulaires associés aux maladies.

FX Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TSTA3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TSTA3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TSTA3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TSTA3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.