FucT-VIII Plasmide Double Nickase (h): sc-402957-NIC

Il gene umano FUT8 codifica l’α1,6-fucosiltransferasi (FucT-VIII), l’enzima localizzato nel Golgi che catalizza la fucosilazione del core degli N-glicani sulle glicoproteine. Questa modifica è un determinante chiave della maturazione delle glicoproteine, delle interazioni recettore–ligando e della trasduzione del segnale a valle, influenzando processi quali l’adesione cellulare, la funzione dei recettori immunitari e la segnalazione mediata dai fattori di crescita. L’attività di FUT8 si integra con la via di N-glicosilazione e con il traffico cellulare lungo la via secretoria, modellando la stabilità delle proteine e la loro esposizione in superficie. Una fucosilazione del core deregolata è stata associata ad alterazioni delle reti di segnalazione e al rimodellamento delle glicoproteine osservati in diversi contesti rilevanti per la malattia, inclusi l’infiammazione e la trasformazione oncogena.

FucT-VIII Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FUT8 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FUT8. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FUT8. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FUT8 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.