FTS Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420422

Descripción general

Mouse Aktip codifica la proteína FTS, un componente de la maquinaria reguladora de los telómeros que se asocia con factores del complejo shelterina y ayuda a mantener la integridad telomérica. FTS se ha vinculado al control del acceso de la telomerasa, a la homeostasis de la longitud telomérica y a la protección de los extremos cromosómicos, influyendo así en la estabilidad del genoma y la capacidad proliferativa. A través de estas funciones, Aktip/FTS se entrecruza con la respuesta al daño del ADN y la señalización de puntos de control del ciclo celular, procesos que con frecuencia se ven alterados en fenotipos de inestabilidad cromosómica y en modelos relevantes para el cáncer. Dilucidar la función de FTS también es informativo para estudios sobre la autorrenovación de células madre, el estrés replicativo y la disfunción telomérica asociada al envejecimiento en sistemas murinos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO FTS (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Aktip en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Aktip junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Aktip tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína FTS.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Aktip para la investigación de la señalización de FTS, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Aktip críticos para la función de FTS
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Aktip para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido FTS CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido FTS CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Aktip. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR FTS (m) y el plásmido HDR FTS (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Aktip para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Aktip definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.