FRP-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422897

Übersicht

Sfrp1 kodiert das sekretierte frizzled-related protein 1 (FRP-1), einen sekretorischen Modulator der Wnt-Signalübertragung, der Wnt-Liganden und Frizzled-Rezeptoren bindet und so die Signalstärke sowie räumliche Gradienten des Signalwegs formt. Durch die Feinabstimmung der kanonischen, β-Catenin-abhängigen Transkription und nicht-kanonischer Wnt-Outputs beeinflusst FRP-1 während der Entwicklung und der Gewebehomöostase Zellproliferation, Differenzierung, Migration und den Umbau der extrazellulären Matrix. In Mausmodellen und mechanistischen Studien wurde eine veränderte Sfrp1-Aktivität mit fehlregulierten Wnt-Signalzuständen in Verbindung gebracht, die für Fibrose, metabolische und skelettale Phänotypen sowie tumorassoziierte Signalkontexte relevant sind. Da Sfrp1 an der extrazellulären Schnittstelle wirkt, wird es häufig genutzt, um autokrine gegenüber parakrinen Kontrollmechanismen Wnt-getriebener Programme zu untersuchen.

Das FRP-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Sfrp1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Sfrp1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Sfrp1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die FRP-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Sfrp1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der FRP-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Sfrp1-Exone abzielen, die für die FRP-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Sfrp1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom FRP-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom FRP-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Sfrp1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das FRP-1 HDR-Plasmid (m) und FRP-1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Sfrp1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Sfrp1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.