FRP-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422897

概要

Sfrp1 は、分泌型フリズルド関連タンパク質1（FRP-1）をコードする。FRP-1 は Wnt シグナル伝達の分泌性モジュレーターで、Wnt リガンドおよび Frizzled 受容体に結合し、経路のシグナル強度や空間的勾配を調整する。カノニカルな β-カテニン依存性転写と、ノンカノニカル Wnt の出力を調節することで、FRP-1 は発生および組織恒常性の過程における細胞増殖、分化、遊走、ならびに細胞外マトリックスのリモデリングに影響を与える。マウスモデルや作用機序の研究では、Sfrp1 活性の変化が、線維化、代謝・骨格表現型、腫瘍関連のシグナル環境などに関わる Wnt 経路状態の破綻と関連づけられている。Sfrp1 は細胞外の界面で機能するため、Wnt 駆動プログラムにおけるオートクライン制御とパラクライン制御を切り分けて解析する目的で、しばしば用いられる。

FRP-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSfrp1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Sfrp1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Sfrp1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、FRP-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、FRP-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Sfrp1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• FRP-1の機能に不可欠なSfrp1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Sfrp1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• FRP-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびFRP-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Sfrp1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  FRP-1 HDRプラスミド（m）および FRP-1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSfrp1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSfrp1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。