frizzled-7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420437

Übersicht

Mouse Fzd7 kodiert Frizzled-7, einen siebenfach transmembranen Wnt-Rezeptor, der extrazelluläre Wnt-Liganden in intrazelluläre Signalausgänge überträgt. Frizzled-7 reguliert sowohl β-Catenin-abhängige Transkriptionsprogramme als auch nicht-kanonische Signalwege der planaren Zellpolarität und des Wnt/Ca²⁺-Signalwegs und beeinflusst damit Proliferation, Polarität, Migration und Zellschicksalsentscheidungen während der Entwicklung und der Gewebehomöostase. Eine veränderte Fzd7-Signalgebung wurde in mehreren experimentellen Modellen mit einer Fehlregulation des Verhaltens von Stamm-/Vorläuferzellen sowie der Aktivierung onkogener Signalwege in Verbindung gebracht, was Fzd7 zu einem nützlichen Ausgangspunkt für die Analyse der Kontrolle von Wnt-Netzwerken macht. In Zellsystemen wird die Perturbation von Fzd7 häufig eingesetzt, um die Spezifität der Wnt-Signalübertragung auf Rezeptorebene sowie das Crosstalk mit Rezeptor-Tyrosinkinasen und Hippo/YAP-assoziierten Prozessen zu untersuchen.

Das frizzled-7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Fzd7-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Fzd7-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Fzd7 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die frizzled-7-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Fzd7-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der frizzled-7-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Fzd7-Exone abzielen, die für die frizzled-7-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Fzd7-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom frizzled-7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom frizzled-7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Fzd7-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das frizzled-7 HDR-Plasmid (m) und frizzled-7 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Fzd7-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Fzd7-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.