Plasmide CRISPR d'Activation (h) FRAS1: sc-407225-ACT

FRAS1 code une protéine associée à la matrice extracellulaire, localisée à l’interface épithélio-mésenchymateuse, et contribue à l’intégrité de la membrane basale au cours du développement embryonnaire. Elle participe à des processus d’adhérence et d’organisation de la matrice qui coordonnent la morphogenèse épithéliale, notamment le développement de la peau et des voies urinaires supérieures, et aide à stabiliser l’architecture tissulaire face aux contraintes mécaniques. Une altération de la fonction de FRAS1 est associée à des troubles du développement caractérisés par des anomalies congénitales multisystémiques, reflétant son rôle dans l’organogenèse. En recherche, FRAS1 est étudiée pour sa contribution à l’assemblage de la matrice extracellulaire, à la formation de la barrière épithéliale et aux réseaux de signalisation du développement qui façonnent la mise en place des tissus.

FRAS1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FRAS1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FRAS1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FRAS1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FRAS1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FRAS1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FRAS1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FRAS1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FRAS1 dans les cellules tumorales présentant une expression de FRAS1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.