Plasmide CRISPR d'Activation (m) FOXI1: sc-420369-ACT

Foxi1 code le facteur de transcription à domaine forkhead FOXI1, un régulateur nucléaire qui contribue à spécifier le destin des cellules épithéliales et contrôle des programmes géniques nécessaires au transport ionique et à l’homéostasie acido-basique. Chez la souris, l’activité de FOXI1 est étroitement liée à la différenciation et à la fonction des cellules intercalaires du canal collecteur rénal, ainsi qu’au développement épithélial de l’oreille interne, en influençant l’expression de transporteurs et de canaux impliqués dans la régulation du pH. Par le biais de ces réseaux transcriptionnels, Foxi1 s’inscrit au carrefour des voies qui gouvernent la maturation épithéliale, le transport membranaire et l’homéostasie tissulaire. La dérégulation des programmes dépendants de FOXI1 est pertinente pour la recherche sur la dysfonction tubulaire rénale et la biologie de l’audition neurosensorielle, où une spécification épithéliale altérée et une expression modifiée des transporteurs peuvent contribuer à des phénotypes associés aux maladies.

FOXI1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Foxi1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FOXI1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Foxi1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Foxi1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FOXI1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Foxi1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FOXI1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FOXI1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Foxi1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.