FOXF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403521

Übersicht

FOXF1 (forkhead box F1) kodiert einen Forkhead-Transkriptionsfaktor, der während der Entwicklung die Identität mesenchymaler Zellen sowie die epithelial-mesenchymale Signalübertragung steuert und dabei eine herausragende Rolle in der Morphogenese der Lunge und der pulmonalen Gefäße spielt. FOXF1 reguliert Genprogramme, die mit der Organisation der extrazellulären Matrix, Zellmigration sowie der Differenzierung zu glatten Muskelzellen/Perizyten verknüpft sind, und ist in Entwicklungswege wie Hedgehog-, WNT/β-Catenin- und TGF-β-Signalgebung eingebunden. Veränderungen der FOXF1-Dosierung oder Störungen seiner Regulation wurden mit angeborenen pulmonalen und vaskulären Fehlbildungen in Verbindung gebracht und zudem in Zusammenhängen aberranter stromaler Umbauprozesse und Tumor–Mikroumgebungs-Interaktionen untersucht. Als nukleäres DNA-bindendes Protein bietet FOXF1 einen gut zugänglichen Ansatzpunkt, um transkriptionelle Netzwerke zu analysieren, die Gewebemusterbildung und vaskuläre Stabilität koordinieren.

Das FOXF1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des FOXF1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des FOXF1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von FOXF1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die FOXF1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von FOXF1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der FOXF1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf FOXF1-Exone abzielen, die für die FOXF1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere FOXF1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom FOXF1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom FOXF1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des FOXF1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das FOXF1 HDR-Plasmid (h) und FOXF1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von FOXF1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten FOXF1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.