Plásmido CRISPR de Activación (h) FOXF1: sc-403521-ACT

FOXF1 (forkhead box F1) codifica un factor de transcripción de tipo hélice-alada que regula la diferenciación mesenquimal y la organogénesis, con funciones destacadas en el desarrollo pulmonar y vascular. En el núcleo, FOXF1 coordina programas génicos que controlan la migración celular, la remodelación de la matriz extracelular y redes transcripcionales asociadas al músculo liso y a los pericitos, integrando señales del desarrollo como la actividad de las vías Hedgehog y TGF-β. Las alteraciones en la dosis de FOXF1 o la disrupción de su regulación se asocian a trastornos congénitos pulmonares y vasculares, y su expresión aberrante se ha estudiado en contextos de remodelación tisular y biología del estroma asociada al cáncer. Estas características hacen de FOXF1 un nodo útil para diseccionar los circuitos transcripcionales que gobiernan las transiciones de estado de las células mesenquimales y las interacciones epitelio–mesénquima.

FOXF1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FOXF1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FOXF1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FOXF1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FOXF1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FOXF1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FOXF1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FOXF1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FOXF1 en células tumorales con expresión de FOXF1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.