FOXC1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-403113-LAC

FOXC1 (forkhead box C1) codifica un fattore di trascrizione della famiglia forkhead che si lega a elementi di DNA cis‑regolatori per coordinare programmi genici che controllano il destino cellulare, la proliferazione, la differenziazione e la migrazione. FOXC1 partecipa a vie di sviluppo e di omeostasi tissutale, inclusa la regolazione della transizione epitelio‑mesenchimale e interazioni dipendenti dal contesto con reti trascrizionali associate a MAPK, TGF‑β e WNT. L’espressione deregolata di FOXC1 e i circuiti trascrizionali a valle sono stati collegati ad alterazioni della specificazione di linea e a fenotipi invasivi in molteplici contesti rilevanti per la malattia, rendendolo un nodo utile per studiare il controllo trascrizionale dell’identità cellulare. In quanto regolatore nucleare, FOXC1 viene spesso analizzato per i suoi effetti sugli stati trascrizionali associati alla cromatina e sul crosstalk tra vie che governa differenziazione e risposte allo stress.

Le particelle di attivazione lentivirale FOXC1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di FOXC1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale FOXC1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione FOXC1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di FOXC1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo FOXC1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.