FMR2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420393

Übersicht

Aff2 kodiert FMR2 (auch bekannt als „AF4/FMR2 family member 2“), ein nukleäres Protein, das an der Transkriptionsregulation und am RNA-Stoffwechsel im Nervensystem beteiligt ist. FMR2 enthält funktionelle Domänen, die mit der chromatinbasierten Genkontrolle verknüpft sind, und wurde mit aktivitätsabhängigen Genexpressionsprogrammen in Verbindung gebracht, die neuronale Differenzierung und synaptische Plastizität prägen. Eine Störung der AFF2/FMR2-Funktion ist mit X‑chromosomal vererbter intellektueller Beeinträchtigung und neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen assoziiert und stellt damit ein relevantes Ziel für die Untersuchung genregulatorischer Mechanismen dar, die Kognition und Verhalten zugrunde liegen. In Mausmodellen ermöglicht eine Beeinflussung von Aff2 die Erforschung, wie Transkriptionskontrolle mit neuronaler Reifung, Schaltkreisfunktion und nachgeschalteten Signalwegen zusammenwirkt, die Lernen und Gedächtnis beeinflussen.

Das FMR2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Aff2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Aff2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Aff2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die FMR2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Aff2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der FMR2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Aff2-Exone abzielen, die für die FMR2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Aff2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom FMR2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom FMR2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Aff2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das FMR2 HDR-Plasmid (m) und FMR2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Aff2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Aff2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.