Plasmide CRISPR/Cas9 KO FMO3 (h): sc-406605

Présentation

FMO3 code la monooxygénase 3 contenant une flavine (FMO3), une monooxygénase microsomale dépendante du NADPH, très active dans le foie humain, qui catalyse la N‑oxygénation et la S‑oxygénation de divers xénobiotiques et amines endogènes. En convertissant la triméthylamine (TMA) en N‑oxyde de triméthylamine (TMAO), FMO3 relie le métabolisme de nutriments alimentaires à la biochimie hépatique d’oxydoréduction et aux profils systémiques de métabolites. L’activité de FMO3 contribue aux capacités de détoxification et influence la signalisation médiée par les métabolites via des interactions avec des réseaux plus larges de biotransformation de phase I/phase II. Une perturbation génétique ou fonctionnelle de FMO3 est associée à une oxydation modifiée des amines, notamment la triméthylaminurie, et est fréquemment étudiée dans le contexte de la variabilité interindividuelle du métabolisme des médicaments et de la modulation de traits métaboliques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FMO3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FMO3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FMO3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FMO3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FMO3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FMO3 pour l'étude de la signalisation de FMO3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FMO3 essentiels à la fonction de FMO3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FMO3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FMO3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le FMO3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FMO3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FMO3 plasmide HDR (h) et le FMO3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FMO3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FMO3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.