FMNL1 Plasmide Double Nickase (h): sc-404817-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- FMNL1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il FMNL1 Double Nickase Plasmid (h) e il FMNL1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira FMNL1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: FMNL1 Antibody (C-5): sc-390023
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
FMNL1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404817-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FMNL1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404817-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La proteina 1 simile alla formina (FMNL1) è un fattore di nucleazione e di allungamento dell’actina della famiglia delle formine correlate a diaphanous, che promuove l’assemblaggio e il rimodellamento dei filamenti attraverso i suoi domini FH1/FH2. È altamente espressa nelle linee ematopoietiche e sostiene processi del citoscheletro tra cui polarizzazione cellulare, adesione e migrazione direzionale, collegando la segnalazione delle GTPasi della famiglia Rho all’organizzazione dinamica dell’actina. La funzione di FMNL1 contribuisce al traffico delle cellule immunitarie e a interazioni fagocitiche o di tipo sinaptico coordinando strutture protrusive e reti di actina associate alla membrana. Un’espressione o una segnalazione di FMNL1 deregolate sono state associate a un comportamento leucocitario alterato e sono state riportate in molteplici contesti di neoplasie ematologiche e tumori solidi, rendendola rilevante per studi meccanicistici su invasione, regolazione immunitaria e fenotipi dipendenti dal citoscheletro.
FMNL1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FMNL1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FMNL1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FMNL1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FMNL1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.