Flt-4 Lentiviral Activation Particles (h): sc-400684-LAC

FLT4 kodiert Flt-4 (VEGFR-3), eine Rezeptor-Tyrosinkinase, die hauptsächlich in lymphatischen Endothelzellen exprimiert wird und Signale von VEGF‑C und VEGF‑D weiterleitet, um die Lymphangiogenese, die Gefäßpermeabilität und die Migration von Endothelzellen zu regulieren. Nach Ligandenbindung aktiviert Flt-4 die kanonischen Signalwege PI3K–AKT, MAPK/ERK und PLCγ, die Proliferations- und Überlebensprogramme während der Gefäßentwicklung und des Gewebeumbaus koordinieren. Eine fehlregulierte FLT4-Signalgebung ist mit lymphatischen Malformationen und veränderter tumorgebundener Lymphangiogenese assoziiert und wird häufig im Kontext von Metastasierungsbiologie und inflammatorischen Mikroumgebungen untersucht. Als Knotenpunkt, der Wachstumsfaktor-Signalgebung mit endothelialen Schicksalsentscheidungen verknüpft, wird FLT4 in der Gefäß- und Lymphgefäßforschung широко als Marker und funktioneller Determinant eingesetzt.

Flt-4 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente FLT4-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Flt-4 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der FLT4-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Flt-4-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen FLT4-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.