Flt-1/VEGFR1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400330-ACT

FLT1 kodiert Flt-1/VEGFR1, eine hochaffine Rezeptor-Tyrosinkinase für VEGF-A, VEGF-B und den plazentaren Wachstumsfaktor, die die Ligandenverfügbarkeit und die Signaloutput in endothelialen und myeloiden Zelllinien moduliert. VEGFR1 ist an Angiogenese, vaskulärer Permeabilität, endothelialer Migration und der Rekrutierung inflammatorischer Zellen beteiligt, unter anderem über Signalwege wie PI3K–AKT, MAPK/ERK und PLCγ-abhängige Signalübertragung. Sowohl membrangebundene als auch lösliche VEGFR1-Isoformen prägen VEGF-Gradienten und die Gefäßreifung und verknüpfen die FLT1-Regulation mit Hypoxieantworten und Gewebeumbau. Eine fehlregulierte FLT1/VEGFR1-Signalisierung wurde mit pathologischer Neovaskularisierung und vaskulärer Dysfunktion in Verbindung gebracht, wie sie in der Krebsbiologie, in ischämischen Situationen und bei entzündlichen Erkrankungen beobachtet wird, was seine Nutzung als mechanistischer Knotenpunkt in der Gefäß- und Mikroenvironment-Forschung unterstützt.

Flt-1/VEGFR1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen FLT1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Flt-1/VEGFR1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des FLT1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der FLT1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Flt-1/VEGFR1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native FLT1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Flt-1/VEGFR1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Flt-1/VEGFR1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem FLT1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.