Flotillin-1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400736-NIC

FLOT1 codifica la flotillina-1, una proteina scaffold associata ai lipid raft, arricchita nella membrana plasmatica e nei compartimenti endosomiali, dove contribuisce a organizzare i microdomini di membrana e a coordinare il traffico vescicolare. La flotillina-1 partecipa all’endocitosi indipendente dalla clatrina, all’internalizzazione dei recettori e alle dinamiche del citoscheletro, influenzando vie di trasduzione del segnale legate alla segnalazione dei fattori di crescita e dei recettori immunitari. Attraverso i suoi ruoli nell’organizzazione della membrana e nello smistamento endosomiale, FLOT1 può modulare la migrazione cellulare, l’adesione e le risposte allo stress. Un’espressione o localizzazione deregolate della flotillina-1 sono state associate ad alterazioni delle reti di segnalazione e a fenotipi rilevanti per la biologia del cancro e per processi neurodegenerativi e infiammatori, supportandone l’utilizzo come bersaglio meccanicistico negli studi di segnalazione e traffico cellulare.

Flotillin-1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FLOT1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FLOT1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FLOT1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FLOT1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.