Plásmido Doble Nickase (h) FKHRL1/FOXO3a: sc-400308-NIC

FOXO3 (FKHRL1/FOXO3a) codifica un factor de transcripción de la familia forkhead box O que integra señales de factores de crecimiento y nutrientes para regular el control del ciclo celular, la resistencia al estrés oxidativo, la autofagia y la apoptosis. La actividad de FOXO3 está estrictamente controlada por modificaciones postraduccionales, incluida la fosforilación mediada por AKT aguas abajo de PI3K–AKT, que impulsa su secuestro en el citoplasma, y por señales activadas por el estrés, como AMPK y JNK, que promueven su localización nuclear y la salida transcripcional. Mediante la regulación de dianas implicadas en el metabolismo, las respuestas al daño del ADN y la proteostasis, FOXO3 contribuye a la homeostasis celular en múltiples linajes. La desregulación de la señalización de FOXO3 se ha asociado con cambios en la tolerancia al estrés y en programas de supervivencia relevantes para la biología del cáncer, la neurodegeneración, la disfunción metabólica y la regulación inmunitaria.

FKHRL1/FOXO3a El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FOXO3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FOXO3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FOXO3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FOXO3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.