Partículas Lentivirales de Activación (m) Fis1: sc-426020-LAC

Fis1 (fission 1) de ratón codifica una proteína de la membrana mitocondrial externa que ayuda a coordinar la fisión mitocondrial al interactuar con la maquinaria de DRP1 y organizar los sitios de escisión, moldeando así la morfología y la distribución de las mitocondrias. A través de sus efectos sobre la dinámica mitocondrial, Fis1 influye en la mitofagia, la eficiencia de la fosforilación oxidativa, la homeostasis de las especies reactivas de oxígeno y la señalización de la apoptosis. La alteración del equilibrio fisión–fusión regulado por Fis1 se ha vinculado con fenotipos de estrés mitocondrial relevantes para la neurodegeneración, la disfunción cardiometabólica y la señalización inflamatoria en diversos sistemas modelo. Como resultado, Fis1 se utiliza con frecuencia para estudiar las vías de control de calidad mitocondrial y la regulación, dependiente de orgánulos, del metabolismo y la supervivencia celular.

Las partículas de activación lentiviral Fis1 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Fis1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Fis1 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Fis1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Fis1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Fis1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.