Filamin 2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402358-ACT

FLNC umano codifica la filamina 2, una proteina scaffold del citoscheletro legante l’actina che reticola la F-actina e collega il citoscheletro corticale alle proteine di membrana, coordinando forma cellulare, adesione e meccanotrasduzione. La filamina 2 partecipa alle adesioni focali e alla segnalazione associata alle integrine, influenzando il rimodellamento del citoscheletro, la migrazione e la trasmissione delle forze nel muscolo e in altri tessuti sottoposti a stress meccanico. Le reti dipendenti da FLNC interagiscono con vie che controllano l’integrità del sarcomero e le risposte allo stress, collegando l’organizzazione del citoscheletro all’omeostasi cellulare. L’alterazione genetica o l’espressione deregolata di FLNC è associata a cardiomiopatie e miopatie scheletriche, a supporto della sua rilevanza per studi sulla biologia muscolare e sui meccanismi di malattia.

Filamin 2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FLNC senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Filamin 2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FLNC nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FLNC, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Filamin 2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FLNC nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Filamin 2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Filamin 2 nelle cellule tumorali con espressione di FLNC silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.