Fibulin-2 Double Nickase Plasmid (h): sc-403644-NIC

FBLN2 kodiert Fibulin‑2, ein sezerniertes extrazelluläres Matrix‑Glykoprotein, das in elastischen Geweben angereichert ist und an Fibronectin, Laminine und Proteoglykane bindet, um die Matrixassemblierung und die Gewebemechanik zu regulieren. Fibulin‑2 ist an der Zell‑Matrix‑Adhäsion, der Organisation der Basalmembran und der Stabilisierung elastischer Fasern beteiligt und beeinflusst dadurch Prozesse wie vaskuläres Remodeling, Wundheilung sowie epithelial‑mesenchymale Interaktionen. Aufgrund seiner Funktionen in der Organisation der extrazellulären Matrix und der Mechanotransduktion wird FBLN2 häufig in Signalwegen untersucht, die mit Fibrose und Gewebeumbau in Zusammenhang stehen, darunter TGF‑β‑assoziierte Antworten und integrinvermittelte Signalgebung. Eine fehlregulierte FBLN2‑Expression und eine veränderte Stromastruktur wurden in unterschiedlichen Pathologien beschrieben, die durch abnorme Matrixablagerung und invasives Verhalten gekennzeichnet sind, was FBLN2 für Studien zur krankheitsrelevanten, mikroenvironment‑getriebenen Biologie bedeutsam macht.

Fibulin-2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des FBLN2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von FBLN2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die FBLN2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit FBLN2-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.