Fibromodulin CRISPR Activation Plasmid (m): sc-420391-ACT

Das Mausgen **Fmod** kodiert Fibromodulin, ein kleines leucinreiches Proteoglykan der extrazellulären Matrix, das an Kollagene bindet und die Fibrillogenese, den Matrixaufbau sowie die Gewebebiomechanik moduliert. Fibromodulin beeinflusst die Zell–Matrix-Signalübertragung und die Verfügbarkeit von Wachstumsfaktoren, einschließlich Interaktionen mit TGF-β und verwandten Remodeling-Programmen, die Fibrose, Wundheilung und die Organisation des Stromas prägen. In muskuloskelettalen und Bindegeweben ist eine veränderte **FMOD**-Expression mit Veränderungen der Sehnen-/Bandintegrität und der Knorpelhomöostase assoziiert; zudem wurde sie im Kontext degenerativer Umbauprozesse und eines entzündungsgetriebenen ECM-Umsatzes untersucht. Diese Eigenschaften machen **Fmod** zu einem nützlichen Ziel, um extrazelluläre Matrixwege, Aktivierungszustände von Fibroblasten und die matrixabhängige Regulation von Zellmigration und Differenzierung in Mausmodellsystemen zu analysieren.

Fibromodulin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Fmod-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Fibromodulin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Fmod-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Fmod-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Fibromodulin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Fmod-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Fibromodulin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Fibromodulin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Fmod-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.