Plasmide Double Nickase (h) FGF-9: sc-403118-NIC

FGF9 code le facteur de croissance des fibroblastes 9 (FGF-9), un ligand sécrété se liant à l’héparine qui signale principalement via FGFR1c/FGFR2c/FGFR3c afin de réguler la prolifération, la survie et la différenciation cellulaires. L’activité de FGF-9 mobilise les cascades canoniques des récepteurs tyrosine kinase, notamment les voies MAPK/ERK, PI3K–AKT et PLCγ, influençant la mise en place des programmes développementaux, les réponses de réparation tissulaire et la communication stroma–épithélium. Une dérégulation de la signalisation FGF9–FGFR a été associée à des altérations des programmes angiogéniques et fibrotiques, et elle est fréquemment étudiée dans le cadre des réseaux oncogéniques de facteurs de croissance et du remodelage du microenvironnement. Par conséquent, FGF9 constitue une cible courante pour l’analyse mécanistique des dynamiques de signalisation paracrine, de la spécification de lignée et des interactions entre voies (crosstalk) dans des modèles cellulaires humains.

FGF-9 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FGF9 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FGF9. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FGF9. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FGF9.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.