FGF-7 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401243-ACT

FGF7 kodiert den Fibroblasten-Wachstumsfaktor 7 (FGF-7), einen parakrinen Liganden, der überwiegend von mesenchymalen Zellen produziert wird und über FGFR2b an epitheliale Zielzellen signalisiert, um Proliferation, Überleben, Migration und Gewebereparatur zu fördern. Die Aktivität von FGF-7 beeinflusst die epithelo-stromale Kommunikation und unterstützt morphogenetische sowie wundheilungsbezogene Programme, wobei nachgeschaltete Signalwege wie MAPK/ERK, PI3K–AKT und verwandte transkriptionelle Netzwerke aktiviert werden. Eine fehlregulierte FGF7/FGFR2b-Signalisierung wurde mit veränderter Barriereintegrität und aberranter epithelialer Expansion in Verbindung gebracht, was sie für Studien zu Entzündung, Fibrose und onkogener Umgestaltung von Signalwegen relevant macht. Als kontextabhängiger Wachstumsfaktor wird FGF-7 häufig im Hinblick auf seine Rolle bei der Modulation epithelialer Differenzierungszustände und mikroenvironmentgetriebener Phänotypen untersucht.

FGF-7 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen FGF7-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

FGF-7 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des FGF7-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der FGF7-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen FGF-7-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native FGF7-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von FGF-7-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des FGF-7-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem FGF7-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.