FGF-23 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-425719

Übersicht

Fibroblasten-Wachstumsfaktor 23 (FGF‑23), kodiert durch das Mausgen *Fgf23*, ist ein endokrines FGF, das überwiegend von Osteozyten und Osteoblasten produziert wird und das systemische Phosphat- und Vitamin‑D‑Gleichgewicht aufrechterhält. Über FGFRs in klothoabhängiger Weise wirkend, hemmt FGF‑23 die renale Phosphatrückresorption und moduliert den Vitamin‑D‑Stoffwechsel; dadurch koordiniert es die Homöostase von Mineralionen mit dem Knochenumbau. Eine fehlregulierte FGF‑23‑Signalgebung ist mit veränderter Phosphatverarbeitung, Defekten der Skelettmineralisierung sowie sekundären Veränderungen in Parathormon- und Vitamin‑D‑Signalwegen verbunden und stellt damit einen zentralen Knotenpunkt der endokrinen Kommunikation zwischen Knochen und Niere dar. Als biomarkerassoziierter Regulator des Mineralstoffwechsels wird *Fgf23* in Modellen einer gestörten Phosphathomöostase sowie der damit verbundenen Knochen- und Nierenphysiologie umfassend untersucht.

Das FGF-23 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Fgf23-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Fgf23-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Fgf23 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die FGF-23-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Fgf23-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der FGF-23-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Fgf23-Exone abzielen, die für die FGF-23-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Fgf23-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom FGF-23 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom FGF-23 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Fgf23-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das FGF-23 HDR-Plasmid (m) und FGF-23 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Fgf23-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Fgf23-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.