Plasmide CRISPR/Cas9 KO FEZF2 (h): sc-406571

Présentation

FEZF2 (FEZ family zinc finger 2) code un facteur de transcription comportant des domaines à doigts de zinc de type C2H2, qui agit comme un régulateur clé du développement du cerveau antérieur et de la spécification des sous-types neuronaux. Au cours du neurodéveloppement humain, FEZF2 influence la corticogenèse en orientant le destin des neurones de projection corticothalamiques et en coordonnant des programmes transcriptionnels liés au guidage axonal, à la migration neuronale et à la régionalisation. Par son rôle dans des réseaux géniques définissant les lignages, FEZF2 contribue à l’établissement des circuits corticaux et de la connectivité synaptique. Une dérégulation ou des variations génétiques des voies de régulation associées à FEZF2 ont été étudiées dans le contexte de phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques du développement cérébral et de l’identité neuronale.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FEZF2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FEZF2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FEZF2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FEZF2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FEZF2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FEZF2 pour l'étude de la signalisation de FEZF2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FEZF2 essentiels à la fonction de FEZF2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FEZF2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FEZF2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le FEZF2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FEZF2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FEZF2 plasmide HDR (h) et le FEZF2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FEZF2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FEZF2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.