Plasmide Double Nickase (h) Ferroportin-1: sc-400872-NIC

SLC40A1 code la ferroportine-1, le principal exportateur cellulaire de fer, qui régule la disponibilité systémique et locale du fer en transportant le fer ferreux à travers la membrane plasmique. La fonction de la ferroportine-1 est coordonnée avec la liaison médiée par l’hepcidine, son internalisation et sa dégradation, reliant ainsi SLC40A1 aux voies de l’homéostasie du fer, au recyclage du fer par les macrophages et à l’absorption intestinale du fer. Une activité altérée de SLC40A1 perturbe le stockage dans la ferritine, la saturation de la transferrine et les réponses au stress oxydatif, avec des implications pour les phénotypes de surcharge en fer et les mécanismes liés à l’anémie. De plus, la ferroportine-1 influence indirectement la signalisation inflammatoire et le métabolisme mitochondrial via des processus enzymatiques et d’oxydo-réduction dépendants du fer.

Ferroportin-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SLC40A1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SLC40A1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SLC40A1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SLC40A1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.